胰蛋白酶是細胞培養(yǎng)實驗中常見的一種試劑，他在細胞培養(yǎng)實驗中怎樣才能發(fā)揮該有的作用呢？又該如何進行實驗呢？讓我們一起來看看！
作用：
1.胰蛋白酶是一種消化酶，可分解許多脊椎動物消化系統(tǒng)中的蛋白質，它存在于胰液中。
2.質膜上的蛋白質負責多種功能，這些功能對于維持細胞的正常生理活動至關重要。
3.一些質膜蛋白（如鈣粘蛋白家族）是粘附蛋白，可作為錨，將細胞骨架蛋白連接到細胞外基質。這有助于細胞粘附和細胞遷移。
4.在細胞培養(yǎng)物中，可以將胰蛋白酶添加到培養(yǎng)基中，通過消化粘附蛋白從培養(yǎng)皿表面釋放貼壁細胞。
5.胰蛋白酶還通過消化粘附蛋白從聚集體中釋放細胞。
6.EDTA也與胰蛋白酶一起添加到細胞培養(yǎng)物中，以螯合培養(yǎng)基中的二價離子。鈣和鎂離子可能抑制胰蛋白酶的作用。
7.最終，胰蛋白酶有助于從細胞培養(yǎng)物中獲得單個細胞，促進細胞的下游處理。
操作步驟：
1.吸取培養(yǎng)基，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次，以除去殘余的血清。
2.加入適量的胰蛋白酶消化液，略蓋過細胞即可。根據細胞的特性可以增加或減少胰酶用量，室溫放置30秒至2分鐘。
3.顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀;或者用槍吹打細胞發(fā)現細胞剛好可以被吹打下來。
4.此時吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的細胞培養(yǎng)液，吹打下細胞，即可直接用于 后續(xù)實驗。如果發(fā)現消化不足，則加入胰酶細胞消化液重新消化。
注意事項：
1.-20℃保存，冰袋運輸，至少1年有效。
2.應根據不同組織和細胞的性質確定最佳消化時間和胰蛋白酶的用量，消化時間不宜過長，以免影響細胞的活力。
3.解凍后宜分裝使用，避免反復凍融。
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